ABSTRACT
El fenotipo RhD negativo en la población caucásica es causado por una deleción completa del gen RHD. Sin embargo, han sido reportadas regiones específicas de este gen en individuos RhD negativo de diferentes grupos étnicos. El objetivo de este trabajo fue investigar la presencia de alelos RHD nulos en pacientes RhD negativo que concurrieron al Hospital Provincial del Centenario. Se tipificaron 12672 individuos y se seleccionaron las muestras RhD negativo halladas. Se determinó el fenotipo Rh completo y posteriormente se investigó la presencia del gen RHD utilizando una estrategia de PCR multíplex. En las muestras que presentaron fragmentos RHD específicos se realizaron reacciones de PCR alelo específicas para determinar el origen de los exones. Se encontraron 653 (5.15%) muestras RhD negativo. Cincuenta y cinco (8.42%) presentaban al menos el antígeno RhC o RhE. Los estudios moleculares permitieron detectar 7 alelos RHD Psi, 5 alelos híbridos RHD-CE(3-7)-D, 2 alelos híbridos RHDCE(3-9)-D y 1 alelo nuevo RHD (46 T>C). La frecuencia de individuos RhD negativo en la población estudiada fue significativamente menor a la reportada en caucásícos. Los resultados moleculares obtenidos indican que 2.30% (15/653) de los individuos que no expresan el antígeno D son portadores de alelos RHD nulos. Los alelos RHD-CE(3-7)-D, RHD-CE(3-9)-D y RHD (46 T>C) están presentes únicamente en individuos RhD negativo que expresan los antígenos RhC y/o RhE con una frecuencia del 14.50% (8/55). Por otro lado, el alelo RHD Psi está asociado exclusivamente al fenotipo dccee, siendo el 1.17% (7/598) de estos individuos portadores del pseudogen RHD Psi. Estos hallazgos señalan la importancia del estudio del polimorfismo molecular del locus RH para el desarrollo de estrategias de tipificación de ADN confiables, que permitan realizar la genotipificación RHD prenatal y optimizar la selección de unidades a transfundir en los Bancos de Sangre.
The RhD negative phenotype in Caucasians is mainly caused by a complete deletion of the RHD gene. However, specific regions of the RHD gene in RhD negative individuals have been reported in different ethnic groups. The purpose of this study was to analyse the presence of silent RHD alleles in RhD negative patients concurring to the Hospital Provincial del Centenario. Blood samples from 12672 individuals were studied and the RhD negative phenotypes were selected. Initially, the complete Rh phenotype was determined and DNA samples were screened using a multiplex PCR strategy to detect the presence of an RHD allele. Samples carrying RHD specific fragments were further studied by RHD exon scanning with allele specific PCR. 653 samples out of the 12672 (5.15%) were found RhD negative. Within this group, 8.42 % were either RhC positive or RhE positive. Molecular studies detected 7 RHD Psi alleles, 5 RHD-CE(3-7)-D hybrid alleles, 2 RHD-CE(3-9)-D hybrid alleles and 1 RHD (46 T>C) novel allele.The frequency of RhD negative individuals observed in the population studied was lower than that reported for Caucasians. Molecular analysis showed that 2.30% (15/653) of the individuals with no expression of the D antigen carry RHD null alleles. RHDCE(3-7)-D, RHD-CE(3-9)-D and RHD (46 T>C) alleles are present only in individuals expressing either RhC or RhE with a frequency of 14.55% (8/55). The RHD Psy is associated with the dccee phenotype and 1.17% (7/ 598) of these individuals carries the RHD Psi pseudogen. These findings highlight the importance of studying the molecular polymorphism of the RH locus so as to develop reliable DNA typing strategies.